尊龙凯时

LbuCas13a Nuclease说明书

【产品名称】LbuCas13a Nuclease           【分子量】141.6KDa

【产品编号】EDE0002                            【形式】液体

【产品简介】

LbuCas13a（又名C2c2）泉源于Leptotrichia buccalis菌株
。LbuCas13a属于Ⅱ类Ⅵ型CRISPR系统效应卵白，是由crRNA介导的核酸内切酶，在识别并切割靶标RNA时，其“隶属切割”活性被激活，可非特异切割系统中单链 RNA(ssRNA)
。通过设计两头标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大
？赏ü庖腔蚴灾绞硬煨Ч
。

【贮存条件及有用期】

有用期1年，生涯条件-20°C；如恒久贮存，建议置于-80°C
。

建议凭证使用次数举行分装，阻止重复冻融
。

【产品特点】

接纳一步法纯化制备，最洪流平保存酶活性，经由测试酶活性显著高于同类产品
。

【活性界说】

在总体积为25 μL的反应系统中，37℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量界说为1 transU
。

例：若某批次 LbuCas13a酶的反式切割活性为9 transU/pmol，则批注1 pmol的该批次LbuCas13a酶可在1 min内，在上述指定的反应条件下，反式切割9 pmol ssRNA探针
。

【质量包管】

样品纯度：～95% （SDS-PAGE判断）
。

【检测办法】

需要准备的其它试剂

1. Reporter：Cas13a 切割底物
。即在剪切反应系统中加入ssRNA报告探针，该探针5′端标记荧光报告基团(FAM)，3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)
？纱钆湮宜镜Reporter举行检测，或自行设计合成 Reporter
。

2. crRNA/gRNA：与Cas13a团结，形乐成能复合物，被目的序列特异性激活
？裳≡裎宜镜crRNA或自行设计合成crRNA
。

免费设计咨询：info@edgene.cn

3. RNase Inhibitor （可
。阂种RNase,避免RNA降解
。（货号：AI101-02）

4. 恒温扩增反应试剂盒
。

【测试反应系统】

【反应条件】

实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号，37℃反应，每 30 sec 收罗一次荧光信号
。

【酶活性比照实验效果】

 

Fig 1. Results of Cas13 collateral cleavage at different concentration.

横坐标为反应时间，纵坐标为苏州克睿MA-1610恒温扩增仪检测效果
。由图可见，5×10^{^9}拷贝靶标RNA可高效激活LbuCas13a酶，10分钟内可完全切割RNA报告探针，并抵达荧光峰值
。

 【注重事项】

1. 为避免 RNase 污染，请坚持实验区清洁整齐，操作时需衣着清洁的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free
。

2. Cas13a 酶对热敏感，容易失活，应全程冰上设置反应系统，并在使用后连忙将酶置于-20℃生涯
。